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毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式

4.5.1 與毛細(xì)管電泳相關(guān)的基本概念
電場強(qiáng)度、電泳淌度、遷移時(shí)間、電泳速度、電滲流、焦耳熱。
4.5.2 基本工作原理
溶液中的帶電粒子以高壓電場為驅(qū)動(dòng)力,沿毛細(xì)管通道,以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移,并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離。
4.5.3 毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)
高靈敏度、高速度、高分辨率、樣品少、易自動(dòng)化、應(yīng)用范圍廣。
4.5.4 毛細(xì)管電泳分離模式
毛細(xì)管電泳有多種分離模式,如毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜、毛細(xì)管凝膠電泳、等電聚焦毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管等速電泳和毛細(xì)管電色譜等。
4.5.4.1 毛細(xì)管區(qū)帶電泳
毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillary zone electrophoresis,CZE)也稱為毛細(xì)管自由溶液區(qū)帶電泳,根據(jù)組分的遷移時(shí)間進(jìn)行定性,根據(jù)電泳峰的峰面積或峰高進(jìn)行定量分析。它適用于小離子、小分子、肽類、蛋白質(zhì)的分離,在一定限度內(nèi)適合于DNA 的分離。應(yīng)用CZE 分離人血清中氨甲喋呤(MTX)及其代謝產(chǎn)物7–羥基氨甲喋呤(7–OH–MTX)。
4.5.4.2 毛細(xì)管凝膠電泳
毛細(xì)管凝膠電泳是將板上的凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。適用于分離、測定肽類、蛋白質(zhì)、DNA 類物質(zhì)的分離。CGE 正在向第二代DNA 序列測定儀發(fā)展,并將在人類基因組計(jì)劃中起重要作用。
4.5.4.3 毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜
毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜又稱微團(tuán)電動(dòng)毛細(xì)管層析,該技術(shù)的**大特點(diǎn)是使毛細(xì)管電泳有可能在用于離子型化合物分離的同時(shí)進(jìn)行中性物質(zhì)的分離,加強(qiáng)了毛細(xì)管電泳的選擇項(xiàng),彌補(bǔ)了中性分子分離方向的不足。因此在各個(gè)領(lǐng)域特別是生物藥物領(lǐng)域顯示了廣泛的應(yīng)用前景。
4.5.4.4 毛細(xì)管等電聚焦電泳
毛細(xì)管等電聚焦電泳是在電場作用下,帶電的分子會(huì)在電解質(zhì)中作定向的遷移,毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過程,具有極高的分辨率,通??梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于0.01pH 單位的兩種蛋白質(zhì),例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。
4.5.4.5 毛細(xì)管等速電泳
毛細(xì)管等速電泳是一種較早采用的模式,是電泳中**的分離組分與電解質(zhì)一起向前移動(dòng)的同時(shí)進(jìn)行分離的電泳方法。常用于分離小離子、小分子、肽類及蛋白質(zhì)。
4.5.4.6 毛細(xì)管電色譜
毛細(xì)管電色譜它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制,是在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁上鍵合(或涂壁)固定相,從而構(gòu)成毛細(xì)管色譜柱,依靠電滲流推動(dòng)流動(dòng)相,攜帶樣品遷移,根據(jù)樣品分子的質(zhì)荷比、分子尺寸及分配系數(shù)的差別而分離。它與色譜法的不同在于,流動(dòng)相通道色譜柱的推動(dòng)力是電場力,而不是壓力。它與區(qū)帶毛細(xì)管電泳法的區(qū)別是具有電泳與色譜二種作用力,因此適用范圍更廣泛。
4.5.5 毛細(xì)管電泳儀的基本結(jié)構(gòu)
毛細(xì)管電泳儀的結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜,主要有高壓源、毛細(xì)管柱、檢測器,以及兩個(gè)供毛細(xì)管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液槽。輸出訊號和記錄裝置相連,記錄裝置可以是一個(gè)普通的記錄儀、積分儀,也可以是有控制功能的計(jì)算機(jī)工作站。圖6-4 是毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖。
圖6-4 毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖
4.5.5.1 毛細(xì)管柱
毛細(xì)管是毛細(xì)管電泳儀的核心部件,毛細(xì)管電泳的分離過程主要在毛細(xì)管內(nèi)完成。毛細(xì)管柱通常都是圓管型的,理想的毛細(xì)管柱應(yīng)是化學(xué)和電惰性的,紫外和可見光可以透過,易于彎曲,有一定的柔性,耐用而且便宜。
4.5.5.2 檢測器
4.5.5.3 毛細(xì)管電泳法的進(jìn)樣技術(shù)
4.5.6 常用各種電泳儀簡介
穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、全自動(dòng)乙纖膜電泳儀、全自動(dòng)熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀、全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀、雙向電泳及雙向電泳-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、高效毛細(xì)管電泳及高效毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用、毛細(xì)管電泳芯片、DNA 測序系統(tǒng)