Bcl-2原癌基因被認為是哺乳動物細胞凋亡過程中的負調(diào)控劑。本法采用鼠抗Bcl-2單克隆抗體，可通過免疫組化或免疫細胞化學(xué)的方法用于檢測組織或細胞中的Bcl-2，或者通過Western blots檢測細胞粗提物。

樣本來源

1. 離心細胞；

2. 細胞涂片、冰凍或石蠟包埋組織切片；

3. 細胞粗提物。

材料與試劑

1. 鼠抗Bcl-2單克隆抗體；

2. 堿性磷酸酶－抗堿性磷酸酶（APAAP）；

3. PBS緩沖液

操作步驟

1. 標本固定：用丙酮或甲醇將標本（冰凍組織切片或新鮮組織涂片）固定于玻片上，－20℃，10分鐘；

2. 抗Bcl-2抗體（1：40～1：80）室溫孵育1小時；

3. PBS洗三次；

4. 用抗鼠抗體（橋聯(lián)抗體）室溫孵育1小時；

5. PBS洗三次；

6. 在APAAP溶液中孵育，室溫30分鐘；

7. PBS洗三次；

8. 加入Fast Red 底物直到出現(xiàn)明顯的紅色；

9. 以蘇木素復(fù)染、封片、觀察結(jié)果；

結(jié)果判斷

Bcl-2蛋白顯紅色。

注意事項

Western blot方法中抗Bcl-2抗體與26KD的Bcl-2原癌基因產(chǎn)物結(jié)合。在離心細胞、細胞涂片、冰凍組織切片，抗體可與Bcl-2蛋白中的41－54位氨基酸結(jié)合。在常規(guī)固定的石蠟包埋組織切片中，由于抗原表位被封閉，因此抗體僅與較少量細胞反應(yīng)。