若目的條帶未出現(xiàn)，或很淡，可試用以下方法增強(qiáng)發(fā)光強(qiáng)度：

1．用清水漂洗膜數(shù)分鐘，重加發(fā)光液進(jìn)行曝光，可延長(zhǎng)曝光時(shí)間；

2．將膜在 PBST 或 TTBS 中洗滌 30 min 或更長(zhǎng)，期間**少換 2 次液；

3．封閉 40~60 min；

4．一抗雜交，室溫 1 h。37℃ 1 h 會(huì)更強(qiáng)，但可能增加非特異條帶；

5．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期間換 2 次液；

6．二抗雜交，37℃ 1 h；

7．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期間換 2 次液；

8．發(fā)光鑒定；

9．若條帶仍未出現(xiàn)或很淡，可以再用 PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min，期間換 2 次液；

10．三抗雜交，室溫 1 h。37℃ 1 h 會(huì)更強(qiáng)，但可能增加非特異條帶。三抗即抗二抗的二抗，比如二抗用羊抗兔，此時(shí)三抗可以選擇兔抗羊或鼠抗羊等；

11．PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min，期間換 2 次液；

12．發(fā)光鑒定。

注：一抗溶液中加入0.2% 疊氮鈉后，可4℃存放**少 2 周，存放一個(gè)月我也用過(guò)，沒(méi)問(wèn)題，再長(zhǎng)時(shí)間還沒(méi)試過(guò)。