Western blot測(cè)試,也稱為免疫印跡,是對(duì)蛋白質(zhì)混合物中特定蛋白質(zhì)的測(cè)試。蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)是在凝膠電泳或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試驗(yàn)后進(jìn)行的,它使用抗體來(lái)鑒定特定的蛋白質(zhì)。
十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是用于分離蛋白質(zhì)以進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡的常用測(cè)試。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)通過(guò)凝膠基質(zhì)時(shí),蛋白質(zhì)按重量和電特性分開。
ELISA測(cè)試使用附著在固體表面上的酶或抗體來(lái)創(chuàng)建測(cè)試表面。然后將樣品添加到測(cè)試表面。與蛋白質(zhì)反應(yīng)或附著的抗體或酶顯示陽(yáng)性結(jié)果。
在凝膠電泳后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡測(cè)試。分離出的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)移(或印跡)到硝酸纖維素膜或尼龍膜上,并通過(guò)被二級(jí)蛋白質(zhì)標(biāo)記的特異性抗體進(jìn)行鑒定。
Western印跡測(cè)試用于確認(rèn)凝膠電泳或ELISA測(cè)試的陽(yáng)性結(jié)果。Western blot檢測(cè)可以更特異性地鑒定蛋白質(zhì),并可以排除假陽(yáng)性。
Western blot檢測(cè)通常用于確認(rèn)人類免疫缺陷病毒(HIV)和萊姆病的陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果。