一、清洗玻璃板 1、洗潔精輕輕擦洗 2、自來(lái)水沖 3、蒸餾水沖 4、筐里晾干 5、梳子用水洗 二、配膠 

材料：玻璃板、梳子、架子、槍?zhuān)?00-1000、20-200、2-20）、DDW、30%Arc-Bis、Tris(pH8.8)、Tris(pH6.8)、10%SDS、10%AP、TEMED。 1、玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊 2、配分離膠 

3、加入玻璃板中 4、加入乙醇1ml 等待０.5小時(shí) 

5、用注射器吸出乙醇， 

6、用水沖洗分離膠3次，第4次**后(加入AP、TEMED前)再用注射器吸出 7、配濃縮膠 8、將玻璃板加滿(mǎn) 9、放入小梳子 等待０.5小時(shí) 

三、上樣 

材料：蛋白、marker、針筒、電泳槽、電泳液、槍?zhuān)?-20ul） 

1、把玻璃板取下，放入小架子，固定于電泳槽（大玻璃板朝外），拔梳子，（若只有一塊膠，對(duì)面用塑料板） 

2、將小架子加滿(mǎn)電泳液，標(biāo)記位置，用針筒抽電泳液通膜 3、根據(jù)要求上樣蛋白（如海馬），**外側(cè)加馬克，用2-20ul槍 四、電泳 

1、放入電泳盒中，盒中加少量電泳液，放上蓋子 2、開(kāi)電泳機(jī) 

電壓先60V，馬克到達(dá)分離膠后調(diào)制110V，等待約2小時(shí) 五、轉(zhuǎn)膜 

材料：6張濾紙、1張PVDF膜（根據(jù)分離膠剪，無(wú)水甲醇中浸泡1min~2min）、轉(zhuǎn)膜夾、轉(zhuǎn)膜緩沖液 

1、取膠，將濃縮膠輕輕刮去，去掉多余的分離膠， 

2、將裁好的膠、浸過(guò)甲醇的PVDF膜和濾紙放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中，10min左右， 3、黑色板在下面，紙—膠—膜—紙（注意趕走氣泡） 

4、轉(zhuǎn)膜夾放入電泳槽，放滿(mǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液，外面放冰塊，加滿(mǎn)水 等待120分鐘，電壓100V 

六、免疫反應(yīng) 

材料：麗春紅、TBST、5%牛奶、一抗、二抗 1、取出一小盒，加入少量麗春紅，（用完回收）2、把膜取出，扔掉膠，依次放麗春紅——TBST，（搖床上) 

3、膜剪成小條帶，放入方格盒，放入TBST（搖床），幾分鐘后放入5%牛奶中封閉抗原（搖床） 等待1小時(shí) 

4、配一抗：配5%的牛奶（5g牛奶，加TBST**100ml），將抗體放入牛奶中。 5、包一抗：將膜放入盛有抗體的5%的牛奶中，搖床上1小時(shí) 6、4℃冰箱中過(guò)夜 

7、第2天，取出膜，TBST中洗，10分鐘X3次 8、加入二抗，封膜，搖床上，1.5—2h 七、化學(xué)發(fā)光 

準(zhǔn)備材料：黃色槍頭、20-200ul槍、剪刀、鑷子、保鮮膜、板、solution、reagent、小盒中的膜 

1、 取出膜，TBST中洗，10分鐘X3次 2、膜放入盒中 

3、加solution、reagent**膜上，（A：B=1：1，約60ul） 4、膜放入保鮮膜上包好 

5、膜放入板上進(jìn)屋 

6、剪膠片放在膜上下，夾在板里， 等待1小時(shí) 

7、膠片先放入顯影液中 8、膠片先放入定影液中 9、用水沖洗干凈