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DNA測序

DNA測序模仿了在染色體復(fù)制過程中復(fù)制細胞DNA的基本過程，只是該過程是在試管或微量滴定板中使用最少的一組組分完成的。大多數(shù)DNA測序技術(shù)都要求有一個“模板”（即要確定其序列的DNA的生物學(xué)樣品）。“引物”（即與模板區(qū)域互補并能夠延伸的短寡核苷酸）；DNA聚合酶，按照模板鏈的指示，在引物上依次添加結(jié)構(gòu)單元。和四個構(gòu)建基塊本身。該技術(shù)還必須體現(xiàn)一種方法，通過該方法可以檢測添加到底漆中的結(jié)構(gòu)單元的順序。使用選擇的檢測方法，

大多數(shù)大型DNA測序設(shè)備都使用熒光染料標記和檢測四個堿基，并根據(jù)大小通過毛細管電泳分離DNA分子，從而可以識別序列中每個位置的堿基。更具體地說，對于添加到測序反應(yīng)中的每個結(jié)構(gòu)單元的分子中的一小部分，該結(jié)構(gòu)單元經(jīng)過化學(xué)修飾并用可區(qū)分的染料標記，這樣，當將修飾的結(jié)構(gòu)單元隨機添加到從引物，復(fù)制“終止”，結(jié)果測序反應(yīng)包含大小不同的分子的混合物。由于每個終止分子的末端均包含染料標記的堿基，因此可以確定與模板互補的鏈的序列。



上圖顯示了一組測序通道，其中電泳用于分離相差一個堿基的分子。激光檢測用于識別每個位置的堿基。使用“ A”為綠色，“ C”為藍色，“ G”為黃色，“ T”為紅色的鍵從下至上“讀取”序列。使用測序儀制造商提供的軟件，可以確定每個位置的染料信噪比，從而可以“調(diào)用”適當?shù)膲A基。堿基順序顯示在“色譜圖”或“跡線”文件中。
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