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南北印跡用水



超純水用于印跡的許多步驟:樣品,緩沖液,凝膠和沖洗液的制備。在進(jìn)行自身印跡之前,無(wú)論是進(jìn)行Southern印跡還是Northern印跡,樣品制備都需要特別注意用于保護(hù)原材料(分別為DNA或RNA)的水質(zhì)。

主要的樣品制備步驟是通過(guò)提取,擴(kuò)增和預(yù)處理使RNA變性以防止形成堿基配對(duì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),從而進(jìn)行分離。

水質(zhì)參數(shù)

  • 離子
    帶電分子可以通過(guò)改變?nèi)芤海ň彌_液,樣品等)的整體電荷,然后加速或延遲遷移來(lái)干擾遷移電泳步驟。

    在雜交步驟中離子的濃度也很重要。為了在最佳條件下進(jìn)行雜交,應(yīng)注意特定的濃度。從幾乎沒(méi)有離子的水開(kāi)始(25°C時(shí)的電阻率18.2MΩ•cm)可確保在正確的離子強(qiáng)度和pH值下制備緩沖液。 
  • 有機(jī)物
    有機(jī)分子會(huì)在雜交過(guò)程中產(chǎn)生干擾。那些帶負(fù)電荷的分子可以像DNA和RNA一樣起作用,并且可以代替DNA或RNA非特異性結(jié)合。帶正電的分子實(shí)際上可以與DNA或RNA和寡核苷酸結(jié)合,從而阻礙或干擾雜交過(guò)程。因此,建議使用低TOC值(<10 ppb或µg / L)以確保有機(jī)物含量方面的水質(zhì)良好。 
  • 核酸
    酶核酸酶降解NA樣品。使用超濾可有效去除這些酶。在將水從系統(tǒng)中抽出并使用之前,將超濾器安裝在凈化單元的出口。請(qǐng)參閱“ 無(wú)核酸酶水”部分。 
  • 細(xì)菌
    細(xì)菌釋放可降解核酸樣品的核酸酶。它們含有DNA,可能會(huì)干擾要檢查的DNA。最終,它們釋放出離子和有機(jī)物,這些離子和有機(jī)物可能會(huì)對(duì)印跡步驟產(chǎn)生負(fù)面影響。用Ultrafilter(BioPak)純化的水細(xì)菌含量<0.1 cfu / mL。 
總而言之,考慮到與印跡步驟相關(guān)的整個(gè)過(guò)程,水應(yīng)不含核酸酶和細(xì)菌,具有高電阻率和低TOC。所有這些都可以在輸送高純度水的凈水設(shè)備的使用點(diǎn)(出口)處使用超濾設(shè)備獲得。