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核酸印跡


核酸印跡是一種成熟的技術(shù),用于鑒定先前在凝膠中分離的特定核苷酸序列的存在。(

Southern印跡以其發(fā)明者英國生物學(xué)家Edwin Southern命名。在Southern印跡中,分析DNA,在Northern印跡中如果是RNA。在這兩種情況下,來自完整凝膠的DNA或RNA都將轉(zhuǎn)移到一塊硝酸纖維素膜或尼龍膜上。然后將膜暴露于雜交探針,即具有特定序列的單個(gè)DNA片段,要確定其在靶DNA(或RNA)中的存在。對探針DNA進(jìn)行標(biāo)記,以便可以通過射線照相,熒光或化學(xué)發(fā)光法對其進(jìn)行檢測。

印跡的第一步是核酸從凝膠到膜的轉(zhuǎn)移,這通常使用毛細(xì)管轉(zhuǎn)移方法完成。在此過程中,將凝膠放置在紙芯的頂部,該紙芯浸入包含轉(zhuǎn)移緩沖液的容器中。膜夾在凝膠和一堆吸收性材料(通常是干紙巾)之間,該吸收性材料通過毛細(xì)管作用使轉(zhuǎn)移緩沖液通過凝膠。然后,凝膠中的核酸分子被緩沖液攜帶并固定在膜上。真空吸印是另一種越來越流行的吸印程序,因?yàn)樗俣雀烨一厥章屎芨?。真空印跡法還使用緩沖液流將核酸帶轉(zhuǎn)移到膜上,但是它使用真空而不是毛細(xì)管作用來創(chuàng)建該流。

一旦轉(zhuǎn)移完成,最初在凝膠上的所有核酸帶就被固定(印跡)在膜上,雜交過程可能開始。將膜與一小段DNA或RNA(探針)一起孵育,該DNA或RNA的序列與膜中特定的DNA或RNA序列互補(bǔ)。這允許探針與膜上的特定DNA片段雜交或結(jié)合。探針先前已被標(biāo)記,通常用放射性原子,熒光染料標(biāo)記或用酶標(biāo)記,該酶在與合適的底物孵育后會(huì)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)。雜交后,標(biāo)記的探針允許從膜上許多不同的DNA片段中檢測目標(biāo)DNA片段。